做好ELISA检测,你必须注意这些问题。
- 来源:牵翼资讯
- 时间:2017-10-26 09:31
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- 检测
酶联免疫吸附技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项经典的分析方法,目前已更多地用于食品检测中,如检测毒素、兽药、农药、非法添加物、过敏原、转基因等。ELISA分析虽然操作简单,但有些操作步骤仍不可忽视。 一、样本前处理注意事项
1、均质。 组织样本:肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆;原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
2、振荡提取。 将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡,使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部,提取待测组分。振荡方式:振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。
3、离心后要保证样本的稀释倍数不变 在用有机溶剂提取过程中,如果出现乳化现象,解决的方法有:一是用吸头轻轻的搅拌,破坏乳化后,再重复离心。二是再加入适量的提取剂,重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。
4、浓缩。 由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。浓缩方式: 氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。注意:在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质干扰。在吹样本时,针头应在液面上空,避免与样本接触,防止产生交叉污染。样本吹干后应立即取下,避免吹的时间过长,影响最终检测结果。不同的药物,吹干后样本的保质期不同,提倡待样本回到室温后立即复溶。
5、净化。 经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰免疫检测中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程,我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的最常见的净化是:液液分配法。
二、酶标分析过程中的注意事项
样本的检测是基于抗原抗体的反应,根据标准曲线,判定样本最终的药物含量。它要求加样的准确性和洗板的一致性。在整个加样的过程中注意实验室温度的恒定,保证反应在试剂盒所示的温度下进行。
1、常见加样方式
①吸一打二(即加样枪在吸液体时只打到第一档,放液时放到第二档。)
②吸二打一(即加样枪在吸液体时打到第二档,放液时只放到第一档。)
在实际操作过程中,提倡用“吸二打一”用这种方式,有如下几个好处:a、加样过程中在板孔内不出现或者很少出现气泡;b、提高加样速度,缩短前后样本反应的时间差。
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