生物素(Biotin)又称VB7、辅酶R，它是一种维持人体自然生长和正常人体机能所必须的水溶性维生素。

但问题来了，说起国标微生物法维生素检测，做过的人都摇头，那叫一个难做和苦逼。

难在哪呢？

前处理复杂，操作步骤繁琐，光标准曲线管就30根，一个样品就24根管，还要一根一根的在分光光度计上读，如果稀释梯度不对，对不起，重来，简直泪奔。

那么如何做好微生物法生物素国标呢？这就是小编今天要讲的重点。其实主要把以下几点掌握好了，国标法那都不是事儿。

虽然国标GB5009.259-2016中没有提及试管等器皿的处理，但是在国标GB5009.210-2016 《食品安全国家标准 食品中泛酸的测定》及GB5009.89-2016 《食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定》中都有特别注明玻璃器皿的处理，可见玻璃器皿中残留的物质对实验结果的影响不小。

其实微生物法很灵敏，所有实验接触的玻璃器皿如果残留了维生素，都会对实验造成一定的影响，所以使用前要彻底洗刷干净。

建议所有玻璃器皿先用清水浸泡半小时后，用去污粉洗刷，流水冲洗3遍以上，再用去离子水润洗3遍以上，沥干后放入烘箱170 ℃干热3 h后使用。

此外，实验所有用品都应检测生物素实验专用，不与其他实验混合使用。

试验前一天下午把活化好的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，第二天早上要密切注意菌株的生长情况，肉汤浑浊但尚未出现沉底的情况即可取出培养箱备用。

样品处理时降温过程要迅速,避免颜色生成。样品稀释后的生物素浓度（一般可通过样品标签标示值获得）应尽量被标准溶液的系列梯度所覆盖，必要时多选几个稀释度。

配制标准系列管时，用来装水、装培养基和标液的瓶子以及相应的移液管都应专用，避免生物素交叉污染。

配置标准系列管时，建议按照：添加水—添加培养基—盖上空白管的试管帽—添加标液和样品稀释液的操作顺序。

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